细胞冻存是保存细胞的重要手段，通过低温来延缓细胞的生命活动。这种技术使细胞能够得以保存，在需要的时候稳拿证券，又可以被复苏用于各种实验。
19世纪末，科学家开始研究低温对生物组织的影响。早期的实验表明，单纯冷冻会导致细胞冰晶形成和渗透压失衡而死亡。1937年，Luyet和Hodapp提出“冰晶损伤”理论，为后续冷冻保护研究奠定了基础。1949年，英国科学家在研究精子冷冻时，偶然发现甘油能显著提高冷冻后精子的存活率。甘油是一种渗透性冷冻保护剂（CPA），可进入细胞内部，降低冰点并减少冰晶形成。它通过平衡细胞内外的渗透压，防止细胞在冷冻过程中因脱水而破裂。1959年，科学家发现二甲基亚砜（DMSO）同样具有优异的冷冻保护效果，尤其适用于哺乳动物细胞。DMSO比甘油更易穿透细胞膜，且毒性较低，迅速成为细胞冻存的标准保护剂之一。1963年Peter Mazur提出冷冻损伤的“两因素假说”：快速冷冻时，细胞内冰晶形成稳拿证券，破坏细胞膜和细胞器；慢速冷冻时，细胞外冰晶形成导致细胞脱水，胞内溶质浓度升高，造成化学毒性。该理论为程序化慢冻法提供了科学依据。
实验过程中，大多数细胞的冻存遵循“慢速冻存”的原则，通过程序降温盒或程序化冷冻仪稳拿证券，控制降温速率（通常为1°C/min），使细胞在冷冻过程中逐步脱水，避免细胞内结冰。该方法显著提高了冻存细胞的存活率。
展开剩余48%研究表明5% -10% 的DMSO最适合细胞冻存，具体比例要根据细胞种类调整，对DMSO敏感的细胞则需要降低比例。根据小尚的经验，8% DMSO适用于大部分细胞系。同时，还需根据细胞培养难度调整血清比例，越难养的细胞越要多加血清，过于脆弱的细胞可用血清+DMSO冻存，不加培养基。我们常用的冻存液配方是92% FBS+8% DMSO(新手推荐)或92% 完全培养基+8% DMSO(高手推荐)。
尚恩非程序性细胞冻存液（无血清）是一种不含血清且不需要经过程序降温步骤的冻存液，可以重悬细胞后直接置于超低温冰箱而无需逐步降温或者程序性冻存盒，极大方便了细胞冻存操作，同时减少了血清对细胞及实验的影响。
无论用何种冻存液，都建议做冻检再正式冻存：即冻存24h后复苏一支稳拿证券，确认细胞状态没问题，即可进行大批量冻存。冻检成功前要留至少一瓶细胞培养，以免复苏失败导致细胞绝种。
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